Selection of an effective affinity sorbent for the isolation of proteins with sialidase activity from human blood serum

Abstract

Целью исследования было определить эффективный аффинный сорбент для выделения белков, обладающих сиалидазной активностью, из сыворотки крови человека. Материалы и методы. Для получения белков, обладающих сиалидазной активностью, было использовано четыре аффинных сорбента: 1) иммобилизованная на агарозе трисиаловая кислота Neu5Ac(α2-8)Neu5Ac(α2-8)Neu5Ac, 2) иммобилизованный на агарозе дериват сиаловой кислоты (Neu5Acα)3 -C3-PAA-biot, 3) иммобилизованный на агарозе дериват сиаловой кислоты 5-amino-Neu2en, 4) иммобилизованный на агарозе дериват сиаловой кислоты 4-aminoNeu5Ac2en. Выделение белков, ответственных за десиалирование липопротеидов низкой плотности (ЛНП), проводили с помощью электрофореза в градиентном полиакриламидном геле. Результаты. Показано, что наиболее эффективно связывает белки, обладающие нейраминидазной активностью, сорбент с (Neu5Acα)3 -C3-PAA-biot. При проведении электрофореза полученных элюатов выделяются белки с молекулярной массой 65 и 116 кДа. The aim of the study was to determine an effective affinity sorbent for isolating proteins with sialidase activity from human blood serum. Materials and methods. Four affinity sorbents were used to obtain proteins with sialidase activity: 1) Neu5Ac(α2-8)Neu5Ac(α2-8) Neu5Ac trisialic acid immobilized on agarose, 2) sialic acid derivative (Neu5Acα)3-C3-PAA-biot immobilized on agarose, 3) sialic acid derivative immobilized on agarose 5- amino-Neu2en, 4) agarose-immobilized sialic acid derivative 4-amino-Neu5Ac2en. Isolation of the proteins responsible for LDL desiallation was performed using gradient polyacrylamide gel electrophoresis. Results. The sorbent with (Neu5Acα)3 -C3-PAA-biot most effectively binds proteins with neuraminidase activity. During electrophoresis of the obtained eluates, proteins with a molecular weight of 65 and 116 kDa are isolated.