Procedimiento para el aislamiento de ADN a partir de sangre coagulada de aves

Abstract

Con la finalidad de aislar ADN genómico de forma económica y segura a partir de muestras de sangre coagulada, se tomaron aproximadamente 250 µL de coagulo de sangre, se agregaron 400 µL de buffer de lisis celular (10 mmol/L Tris-HCl, pH 8,0; 10 mmol/L KCl; 10 mmol/L MgCl2; 2 mmol/L EDTA, pH 8,0; 0,4 mol/L NaCl y 10g/L SDS) y se dejó incubar hasta el día siguiente a temperatura ambiente. Se añadieron 350 µL de cloroformo y se agitó por 10 segundos, después se añadieron 350 µL de acetato de potasio 5M, se agitó por 10 segundos y se centrifugó por 10 minutos (14.000 g). El sobrenadante se transfirió a tubos nuevos y se agregaron 700 µL de isopropanol frio, se centrifugó por 5 minutos a 14.000 g y se descartó el sobrenadante. Posteriormente se realizaron dos lavados con etanol al 70%  (700 µL c/u), se centrifugó por 5 minutos y se  descartó  el líquido. El sedimento se secó 10 min a 45 0C y 8 min a 65 0C para después rehidratar con 20 – 25 µL de TE-1X. La concentración y pureza de los aislados de ADN se determinó mediante espectrofotometría a 260 nm, para un promedio de 2.288,12 ng/µL y 2,04 para la relación A260/A280. La idoneidad del ADN extraído se evaluó mediante la amplificación por PCR de los marcadores MCW0241 y LEI0122. El procedimiento descrito permitió obtener ADN de buena calidad y en grandes cantidades de forma simple, confiable y económica.