Comparación de tres tratamientos para la crioconservación de serovares de Leptospira en nitrógeno líquido

Abstract

La preservación de bacterias pertenecientes al género Leptospira por métodos tradicionales -repiques frecuentes del cultivo- es costosa, dispendiosa y puede generar pérdidas de las características genéticas del cultivo. En el presente estudio se estandarizó una técnica de crioconservación en nitrógeno líquido para seis serovares de Leptospira -Pomona, Hardjoprajitno, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa y Bratislava-, usando como agente crioprotector el dimetil sulfóxido (DMSO) a una concentración final de 2% y una tasa de enfriamiento de 1°C/min y se comparó con el uso de glicerol a concentraciones finales de 0,2% y 10%. Los tres métodos se evaluaron mediante la determinación de la viabilidad bacteriana antes y después de la congelación (a 0, 30, 90, 180, 270 y 360 días) por recuento bacteriano en cámara. Los datos se sometieron a análisis de varianza y comparación por parejas usando la prueba de Bonferroni. La presencia de glicerol al 10% (concentración final) en el medio crioconservante disminuyó la viabilidad de los serovares. La técnica de criopreservación en nitrógeno líquido con DMSO al 2% y glicerol al 0,2% (concentraciones finales) permitió la exitosa conservación de los seis serovares de Leptospira. El método de criopreservación aseguró una alta viabilidad, lo que disminuyó costos y tiempo en su ejecución y demostró ser un mejor método de conservación a largo plazo en relación con el mantenimiento tradicional por subcultivos periódicos.