SERUM ÖRNEKLERİNDE ALFA-2-MAKROGLUBULİN TAYİNİ

Abstract

Amaç: Proteomik, klinik çalışmalarda yaygın olarak kullanılan en hızlı büyüyen omiklerden biridir. Proteomik, tek bir hücreden başlayarak karmaşık biyolojik örneklere kadar geniş bir örnek yelpazesinde kalitatif ve kantitatif protein analizini içerir. Protein bazlı biyobelirteç çalışmaları, metabolik hastalıklar, kanser ve nöropsikiyatrik hastalıklar dahil olmak üzere birçok hastalığa hem tanısal hem de prognostik amaçlarla uygulanmıştır. Alfa-2-makroglubulin (A2MG), kan pıhtılaşması, protein bağlanması ve proteaz inhibisyonu dahil olmak üzere çeşitli biyolojik süreçlerde yer alan, klinik önemi olan ve salgılanan bir proteindir. A2MG analizi için mevcut yöntemler, belirli bir protein birimi veya benzersiz bir peptit yoluyla immün spesifik bağlanmaya odaklandıklarından sınırlıdır. Tek bir protein farklı formlarda (kompleksler, modifikasyonlar, vb.) olabileceğinden ve biyolojik aktivite yapıya özel olduğundan, kapsamlı bir analiz gereklidir. Bu çalışmada kapsamlı A2MG analizi için yeni bir Kütle Spektrometresi (MS) tabanlı yöntem geliştirildi. Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada, kapsamlı A2MG analizi için yeni bir Kütle Spektrometresi (MS) tabanlı yöntem geliştirilmiştir. Analitik yöntem geliştirme referans insan serumu ve A2MG protein standardı ile yapılmıştır. Proteolitik protein sindirimi için tripsin kullanılmış ve sindirimden önce ve sonra proteinin denatürasyonu Dairesel-Dikroizm (CD) spektroskopisi kullanılarak test edilmiştir. Hedefli MS yöntemi, serumda A2MG için 12 benzersiz peptidi izlemek için geliştirilmiştir. Sonuç ve Tartışma: Bu çalışmada, biyolojik farklılıkları gözlemlemek için geliştirilen tek bir protein için çoklu peptitlerin ölçülmesi ile sağlam ve güvenilir serumda A2MG analizi geliştirilmiştir. Yöntem, diğer proteinlere de kolayca uygulanabilir. Hedeflenen MS konsepti, daha sonra klinik laboratuvarlara kolayca aktarılabilen ideal bir niceleme ve doğrulama platformu sağlayacaktır.