Colheita de medula óssea em cães: modelo para obtenção da fração total de células mononucleares

Abstract

No presente trabalho foi elaborada uma técnica para protocolo de colheita de medula óssea (MO) (10ml. kg-1), do osso femoral, para isolamento, quantificação e viabilidade da fração total de células mononucleares (CM). Para tanto, 40 cães machos ou fêmeas, sem raça definida, com idade aproximada de dois anos, pesando em torno de 10kg, foram submetidos a procedimento asséptico em ambiente cirúrgico para colheita de MO. Para a obtenção de uma quantidade suficiente de CM, durante o procedimento foi utilizada a agulha tipo Steis anatômica, que favoreceu a colheita de volume sangüíneo em menor espaço de tempo e não danificou a viabilidade celular. Também foi utilizado o Kit Bone Marrow collection, que teve a finalidade de filtrar as espículas ósseas, mantendo a integridade das CM colhidas durante o período decorrido para o acondiconamento do sangue. Durante o período da colheita de MO, os animais foram submetidos à collheita de sangue periférico (pré, trans e pós-operatório) para avaliações hematológicas e sofreram autotransfusão sangüínea para suprir a queda acentuada de hemoglobina ocorrida nos primeiros momentos da coletaheita. O total de MO colhida e filtrada foi colocado lentamente sob gradiente de densidade Histopaque (1.077g ml-1). O material foi centrifugado a 440 x g por 30 minutos e o anel de células foi colhido, lavado e centrifugado três vezes em meio contendo solução salina 0,9%, DMEM e soro sangüíneo autólogo estéril. Foi realizada a contagem do anel celular em câmara de Neubauer e foi verificada sua viabilidade utilizando corante vital. Neste estudo foi verificado que no volume de MO colhido foi possível obter a média de 2,57 x 10(6) (± 1,56) CM kg-1 e a viabilidade celular foi superior a 90% (96,72 ± 2,9%). Conclui-se que a técnica de colheita de MO com agulha Steis com lavagem celular no meio contendo soro autólogo e Kit Bone Marrow e agulha Steis com lavagem celular no meio contendo soro autólogo permite obter um número ideal e indicado de CM viáveis. Esse número pode ser aplicado diretamente em lesões teciduais com objetivo de potencializar o processo de regeneração.