A Multiplex Nanopore Sequencing Approach for the Detection of Multiple Arboviral Species

Author:

Xavier Joilson1ORCID,Fonseca Vagner2ORCID,Adelino Talita3,Iani Felipe C. M.3ORCID,Pereira Glauco C.3,Duarte Myrian M.3,Lima Mauricio4ORCID,Castro Emerson4ORCID,Oliveira Carla5ORCID,Fritsch Hegger1ORCID,Guimarães Natalia3,Lamounier Ludmila O.3,Barreto Fernanda Khouri6ORCID,Braga de Oliveira Camilo M. M.7,Maymone Gonçalves Crhistinne C.8ORCID,Malta Lima Danielle9,de Oliveira Elaine C.10,de Castro Lichs Gislene G.11,Gomes Iago12,Mazaro Janaina13,Rodrigues Janete T. N.7,Abrantes Jayra12,Colares Jeová K. B.9ORCID,Luz Kleber G.14,Barbosa da Silva Luana10,Demarchi Luiz11,Câmara Magaly C. B.12,Umaki Zardin Marina C. S.11,Sabatini Mello Pinheiro Rafaela15ORCID,Barbosa Souza Rutilene7,Haddad Simone K.16,Figueiredo da Silva Stephanni10,Slavov Svetoslav N.16ORCID,Rocha Themis12,Morel Noelia17,Chiparelli Hector17ORCID,Burgueño Analía17,Bórmida Victoria17,Cortinas María N.17,Martín Rosario S.17,Pereira Allan C.18,dos Santos Marcelo F.18,André Júnior Walter18,Mendez Rico Jairo19,Franco Leticia19,Rosewell Alexander2,do Carmo Said Rodrigo F.2,de Albuquerque Carlos F. C.2ORCID,Noia Maciel Ethel L.20,Santini de Oliveira Marília21,Venâncio da Cunha Rivaldo22,Vinhal Frutuoso Livia C.23,de Filippis Ana M. B.5,Giovanetti Marta42425ORCID,Carlos Junior Alcantara Luiz425ORCID

Affiliation:

1. Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte 31270-901, Brazil

2. Organização Pan-Americana da Saúde, Organização Mundial da Saúde, Brasília 70800-400, Brazil

3. Laboratorio Central de Saúde Pública do Estado de Minas Gerais, Fundação Ezequiel Dias, Belo Horizonte 30510-010, Brazil

4. Instituto Rene Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte 30190-002, Brazil

5. lnstituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro 21040-900, Brazil

6. Instituto Multidisciplinar em Saúde, Universidade Federal da Bahia, Vitória da Conquista 45029-094, Brazil

7. Laboratório Central de Saúde Pública do Acre, Rio Branco 69900-604, Brazil

8. Secretaria de Saúde do estado do Mato Grosso do Sul, Campo Grande 79031-350, Brazil

9. Faculty of the Graduate Program in Biotechnology (Renorbio), Universidade de Fortaleza, Fortaleza 60811-905, Brazil

10. Laboratorio Central de Saúde Pública do Mato Grosso, Cuiabá 78060-628, Brazil

11. Laboratorio Central de Saúde Pública do Mato Grosso do Sul, Campo Grande 79074-460, Brazil

12. Laboratório Central de Saúde Pública do Rio Grande do Norte, Natal 59037-170, Brazil

13. Secretaria Estadual de Saúde do estado do Acre, Rio Branco 69900-064, Brazil

14. Department of Infectious Diseases, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal 59078-900, Brazil

15. Laboratório de Citogenética, Universidade Federal do Acre, Rio Branco 69920-900, Brazil

16. Fundação Hemocentro de Ribeirão Preto, Ribeirão Preto 14051-140, Brazil

17. Departamento de Laboratorios de Salud Pública, Ministerio de Salud Pública, Montevideo 11200, Uruguay

18. Laboratório de Fronteira Tabatinga, Tabatinga 69640-000, Brazil

19. Pan American Health Organization, Washington, DC 20037, USA

20. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente, Ministério da Saúde, Brasília 70058-900, Brazil

21. Coordenação Geral dos Laboratórios de Saúde Pública, Ministério da Saúde, Brasília 70058-900, Brazil

22. Fundação Oswaldo Cruz, Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos, Rio de Janeiro 21040-090, Brazil

23. Coordenação Geral das Arboviroses, Ministério da Saúde, Brasília 70058-900, Brazil

24. Sciences and Technologies for Sustainable Development and One Health, Universita Campus Bio-Medico di Roma, 00128 Roma, Italy

25. Climate Amplified Diseases and Epidemics (CLIMADE), Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte 30190-002, Brazil

Abstract

The emergence and continued geographic expansion of arboviruses and the growing number of infected people have highlighted the need to develop and improve multiplex methods for rapid and specific detection of pathogens. Sequencing technologies are promising tools that can help in the laboratory diagnosis of conditions that share common symptoms, such as pathologies caused by emerging arboviruses. In this study, we integrated nanopore sequencing and the advantages of reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) to develop a multiplex RT-PCR protocol for the detection of Chikungunya virus (CHIKV) and several orthoflaviviruses (such as dengue (Orthoflavivirus dengue), Zika (Orthoflavivirus zikaense), yellow fever (Orthoflavivirus flavi), and West Nile (Orthoflavivirus nilense) viruses) in a single reaction, which provides data for sequence-based differentiation of arbovirus lineages.

Publisher

MDPI AG

Subject

Virology,Infectious Diseases

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