HÜCRE KÜLTÜRÜ ORTAMINDA KARVAKROLÜN KOBALT KLORÜR İLE İNDÜKLENEN KİMYASAL HİPOKSİDEKİ KORUYUCU ROLÜ

Abstract

Amaç Hipoksi nöronal hasar açısından en önemli faktörlerden biridir. Nöronlarda eksprese edilen TRPM7 katyon kanallarının hipoksi ve hücresel pH değişimleri dahil birçok faktörle aktive olduğu bilinmektedir. Bu nedenle bu araştırmada deneysel çalışmalarda hipoksi modeli oluşturmak için sıklıkla kullanılan kobalt klorür (CoCl2) ile indüklenen in vitro hipoksi modelinde TRPM7 katyon kanallarının güçlü blokörü karvakrolün hücresel sağkalım ve ölüm parametreleri üzerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem SH-SY5Y hücreleri kültür flasklarında çoğaltıldı. Hücrelere hipoksi uygulaması için 200 μM CoCl2 içeren medyum ile 24 saat inkübasyon yapıldı. Karvakrolün etkisinin sınandığı grupta ise hücreler TRPM7 kanal inhibisyonunu sağlamak üzere 1 saat karvakrol (250 μM) içeren medyum ile inkübe edildikten sonra hipoksi uygulanarak inkübasyon tamamlandı. Ardından kültür kaplarından kaldırılan hücreler, apoptoz testi, MTT hücre canlılığı analizi, reaktif oksijen türleri (ROT) üretimi tayini, mitokondriyal membran depolarizasyonu (MMD) tayini ve kaspaz 3, 8 ve 9 enzim aktiviteleri tayini yapıldı. Bulgular Kontrole kıyasla hipoksi uygulaması yapılan grupta hücre canlılığı azalırken canlılığın azaldığını gösteren diğer parametrelerde (apoptoz, ROT üretimi, MMD ve kaspaz aktivitelerinde) artış olduğu belirlendi. Karvakrol ön inkübasyonu sonrasında CoCl2 ile hipoksi uygulanan grupta ise hücresel canlılığın düştüğünü gösteren parametrelerin yalnız CoCl2 uygulanan gruba kıyasla anlamlı ölçüde azaldığı gözlemlendi. Sonuç Karvakrol uygulaması ile hipoksik koşulların ortaya çıkardığı anormal hücresel hasar durumu ve hücresel ölüm mekanizmaları yavaşlatılabilmektedir. TRPM7 katyon kanal ekspresyonu iyi bilinen SH-SY5Y hücrelerinde karvakrolün olumlu etkilerinin daha çok TRPM7 kanalları aracılı gerçekleştiği düşünülmektedir.