Dot Blot para identidad del polisacárido de Streptococcus pneumoniae serotipo 14 y toxoide tetánico en vacunas conjugadas

Abstract

Las autoridades regulatorias recomiendan el uso de técnicas inmunoquímicas para determinar la identidad de los antígenos presente en las vacunas conjugadas. Con el surgimiento de las vacunas multivalentes se ha hecho necesario el uso de técnicas inmunoquímicas con el empleo de anticuerpos monoclonales (AcM) para incrementar la sensibilidad de la determinación. El objetivo de este estudio fue establecer las condiciones analíticas que permitan utilizar el Dot Blot como técnica para determinar la identidad del polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae serotipo 14 (PsC 14) y del toxoide tetánico (TT) utilizada como proteína carrier en vacunas conjugadas multivalentes. AcMs contra el PsC 14 y el TT fueron utilizados, además fueron utilizados varios lotes de conjugados monovalentes del PsC 14, lotes de un candidato vacunal heptavalente contra el neumococo con TT como proteína transportadora y lotes de TT, todos producidos en el Instituto Finlay de Vacunas. Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 10µL de muestras de los conjugados monovalentes en una dilución de 1/10 (vol/vol) e igual volumen para las vacunas heptavalentes. Quedó demostrado que a la concentración de 2µg/mL para el AcM contra el PsC 14 y a 2,5µg/mL para el AcM contra TT fueron suficientes para la determinación; mientras que los tiempos de incubación fueron ajustados a 37oC por 30 min. Como conclusiones de este trabajo podemos plantear que quedaron establecidas las condiciones de trabajo en el laboratorio para determinar la identidad del polisacárido capsular de S. pneumoniae serotipo 14 y para el toxoide tetánico en las vacunas conjugadas multivalentes por el método del Dot Blot.