Kanatlılarda Kronik Solunum Yolu Hastalığının (CRD) Serolojik Tanısı İçin in-House Enzyme- Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Geliştirilmesi

Abstract

Tavukların üst solunum yollarında Mycoplasma gallisepticum (MG)’un oluşturduğu kronik solunum sistemi hastalığı (CRD), dünyanın birçok ülkesinde kanatlı sağlığı ve hayvansal üretim üzerinde büyük etkileri olan, ciddi ekonomik kayıplara sebebiyet veren bulaşıcı bir infeksiyondur. Hem hastalığın teşhisinde hem de antikor titresinin belirlenmesinde yaygın olarak kullanılan Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) sensitivite ve spesifitesi yüksek olan bir testtir. Bu çalışmada, CRD infeksiyonuna karşı gelişen antikorları saptamak için farklı suşların antijen olarak kullanıldığı “in house” bir ELISA prototipi geliştirilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla 1 standart suş (MG S6), 1 aşı suşu (MG 6/85) ve 3 saha suşu (MG HMA 9, MG HMA 79, MG HMA 120) olmak üzere 5 suş ile hazırlanan ELISA’ların referans serumlar (125 gerçek pozitif ve 44 gerçek negatif) kullanılarak duyarlılığı ve özgüllüğü saptanmıştır. Buna göre MG 6/85, MG HMA 9, MG HMA 79, MG HMA 120 ve MG S6 suşlarından hazırlanan ELISA’ların duyarlılığı sırası ile % 92, %94, %95, % 96,8 ve % 92 olmuştur. Testlerin özgüllüğü aynı sıra ile, % 95,6 %95,6, %95,6, %96,7 ve % 93,6 olarak hesaplanmıştır. Özgüllüğü ve duyarlılığı diğerlerine göre daha yüksek olan MG HMA 120 suşundan hazırlanan ELISA prototipi ticari üretim için seçilmiştir. M. gallisepticum ile infekte bir sürüden alınan 35 serumun MG HMA 120 ELISA ile test edilmesi sonucunda serumların 28 adedi pozitif, 5 adedi şüpheli ve 2 adedi negatif olarak saptanmıştır. OD değerlerine bağlı olarak aynı serumların ticari MG ELISA ile test edilmesi ile alınan sonuçlar yerli MG HMA 120 ELISA ile alınan sonuçlar karşılaştırılmıştır. İki kit arasındaki yüksek bir korelasyon katsayısı bulunmuş (Pearson’s korelasyon katsayısı (r)=0,78, p=0,01) ve yerli bir suştan yeni geliştirilen in house ELISA’ nın M. gallisepticum’un neden olduğu CRD vakalarında güvenle kullanılabilecek, ticari muadillerine göre benzer özgüllük ve duyarlılık gösteren ve saha kullanımı için pratik ve ucuz bir alternatif olduğunu göstermektedir.