Evaluación de la maduración in vitro de ovocitos bovinos por la presencia del primer cuerpo polar y la tincion de hoechst

Abstract

El objetivo de este estudio fue emplear la tincion de Hoechst 33342 para confirmar la maduración in vitro de ovocitos bovinos además de la identificación del primer cuerpo polar. Se utilizaron 48 ovarios obtenidos en el rastro al momento del sacrificio de las vacas, estos fueron transportados en SSF con 1% de antibiótico a temperatura ambiente. Una vez en el laboratorio los ovocitos se obtuvieron por medio de aspiración de folículos con un diámetro de 2-6 mm. Se seleccionaron ovocitos calidad I y II, según la clasificación de Loos y las normas de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones (IETS), y cultivados para su maduración en medio TCM-199, adicionado con 10% de suero fetal bovino (SFB), 0.5 μg/ml de FSH, 0.1 UI/ml de hCG, 50 μg/ml de gentamicina y 0.2 mM/ml de piruvato de sodio, bajo condiciones de 5% de CO2, 38.5 ºC y 100% de humedad relativa durante 24 horas. Los ovocitos que presentaban el primer cuerpo polar, fueron considerados como maduros, y seleccionados para confirmar el estado meiótico mediante la tinción de Hoechst 0.5 μg/ml 33342 por 10 minutos, para confirmar el estado de maduración. Los resultados  obtenidos fueron de 88% de ovocitos con buena expansión del cúmulos, y un 72.7% de maduración confirmada por la tinción de Hoechst 33342; se concluye que es fundamental evaluar con técnicas confiables cada una de las etapas involucradas con la técnica de fin, para entender las variaciones en los resultados con los distintos protocolos empleados para la maduración de ovocitos in vitro.