Método de genotipagem para detecção de polimorfismos no gene CSN2 em vacas leiteiras Girolando

Abstract

O objetivo deste estudo foi padronizar um método de genotipagem in house para detecção da mutação de nucleotídeo único no éxon 7 do gene CSN2 em vacas da raça Girolando oriundas de uma propriedade rural do Norte de Minas Gerais. Para tal, amostras de sangue de nove vacas previamente genotipadas foram coletadas randomicamente e submetidas ao procedimento de extração de DNA. Posteriormente foi realizada a análise de polimorfismo de fragmentos de restrição pela PCR (PCR-RFLP) seguida da digestão dos amplicons obtidos com a enzima de restrição DdeI. A confirmação do relacionamento genético dentre as amostras foi realizada pela analise multivariada Cluster Analysis com o método de ligação completa para o cálculo da distância Euclidiana e geração de um dendrograma pelo software estatístico Minitab v.16. O amplicon de 121pb correspondente à região parcial do gene CSN2 foi detectado em todas as amostras. Das nove amostras analisadas, seis foram identificadas o genótipo A2A2 e três A1A1 para o gene CSN2. Esse resultado indicou 100% de coincidência entre os resultados do método in house e a genotipagem comercial. O método PCR-RFLP in house padronizado pode ser útil para a rápida e confiável genotipagem do gene CSN2 em bovinos da raça Girolando.