Validação de método de PCR para detecção de micoplasmas no controle de qualidade da vacina de Febre Amarela

Author:

Lawson-Ferreira Rafael,Santos João Pedro Sousa,Parmera Danilo,Guimarães Rosane Cuber,Coelho Joyce Brito de Carvalho,Frota Simone Cascardo,Mattoso Josiane Machado Vieira,Oliveira Carina Cantelli Pacheco de,Hokama Darcy Akemi,Filippis Ivano de,Nascimento Elmiro Rosendo do,Caride Elena Cristina

Abstract

Dentre as vacinas produzidas por Bio-Manguinhos, um importante centro de produção de imunobiológicos da América Latina, destaca-se a vacina de febre amarela (FA) que é produzida em ovos embrionados. Para garantir a excelência e a segurança da vacina, testes de controle de qualidade são realizados durante a produção. A Organização Mundial de Saúde (OMS) exige dos produtores a ausência de Mycoplasma orale, M. pneumoniae, M. gallisepticum e M. synoviae em produtos biológicos. Micoplasmas são micro-organismos fastidiosos, sendo necessários 35 dias para que os testes de cultura sejam conclusivos. Neste estudo foram selecionados métodos de amplificação de fragmentos do gene 16SrRNA para detecção de micoplasmas em produtos intermediários da vacina de FA. Esta metodologia padronizada foi capaz de detectar baixas concentrações de micoplasmas nos produtos intermediários e a ausência de amplificação inespecífica foi demonstrada. Olimite de detecção variou entre 3,1 e 12,5 unidades formadoras de colônia; e nas amostras testadas a sensibilidade e a especificidade foram de 100 %. Oprotocolo de PCR para detecção de micoplasmas na vacina foi validado pela análise de 286 amostras. Bio-Manguinhos produz 10.000.000 doses de vacina de febre amarela por ano e, desde 2008, este método tem sido empregado com sucesso, complementando-se a abordagem tradicional.

Publisher

Instituto Adolfo Lutz

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