Condiciones para el análisis de proteínas del micelio de Lentinula edodes obtenido por fermentación en estado líquido

Abstract

Lentinula edodes es una seta comestible con potencial para el desarrollo de nutraceúticos. Sin embargo, son incipientes los trabajos enfocados en su producción biotecnológica y el desarrollo de herramientas analíticas que permitan profundizar en su composición. En esta investigación se estudió la producción de biomasa del hongo en el tiempo mediante fermentación en estado líquido y se seleccionaron las condiciones que permiten la obtención de extractos para la aplicación de herramientas para análisis proteómicos. Los métodos de extracción de proteínas, ácido tricloroacético (TCA)-Acetona y TCA-Acetona-Fenol, fueron comparados en términos del rendimiento de extracción y los perfiles de separación usando electroforesis en 1D (SDS-PAGE) y 2D (IEF-SDS PAGE). Se determinó que a los 10 días de crecimiento se obtiene la mayor producción de biomasa y proteína total. La extracción con TCA-Acetona-Fenol presentó un mayor rendimiento, mayor resolución y número de bandas en la electroforesis 1D. En 2DE los dos métodos permitieron la extracción de proteínas con puntos isoeléctricos en el rango de pH 3-10, pero el método TCA-Acetona-Fenol conllevó a una extracción diferencial, favoreciendo el rango de 33 a 113 kDa. Estos resultados se constituyen en una primera aplicación de técnicas de separación electroforética para futuros estudios proteómicos