In Vitro Effects of Diclofenac Sodium on Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase and Glutathione Reductase Enzymes Purified from Sheep Spleen Tissue

Abstract

Bu çalışmada, artrit ve akut yaralanmalarda enflamasyonu önlemek ve ağrıyı dindirmek için kullanılan diklofenak sodyumun, koyun dalak dokusundan saflaştırılan glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimi (G6PD; E.C. 1.1.1.49) ve glutatyon redüktaz enzimi (GR; E.C. 1.8.1.7) üzerine in vitro etkileri araştırıldı. Çalışmanın ilk aşamasında G6PD ve GR enzimleri koyun dalak dokusundan, amonyum sülfat (NH4)2SO4 çöktürmesi ve 2', 5' ADP-Sepharose-4B jel afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Enzimlerin saflık dereceleri sodyum dodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) metodu ile kontrol edildi. Çalışmanın ikinci aşamasında saf olarak elde edilen enzim aktiviteleri üzerine diklofenak sodyumun etkileri araştırıldı. Enzimler üzerinde inhibisyon etkisi gösteren diklofenak sodyumun için % Aktivite-[I] grafiği çizilerek IC50 değerleri hesaplandı. Ayrıca beş farklı substrat konsantrasyonu ve üç farklı inhibitör konsantrasyonlarıyla ölçümler yapılarak Lineweaver-Burk grafikleri çizildi. Elde edilen bu grafiklerden diklofenak sodyumun G6PD enzimini 0.51 mM, IC50 değeri ve 0.48 ± 0.01 mM Ki değeri ile yarışmasız olarak inhibe ettiği belirlendi. GR enzimini ise 6.55 mM IC50 değeri ve 15.69 ± 0.84 mM Ki değeri ile yarışmasız olarak inhibe ettiği tespit edildi.