Eosin-5-maleimide Binding Test in the Diagnosis of Hereditary Spherocytosis in Сhildren

Abstract

Цель. Определить диагностическую значимость теста связывания красителя эозин-5-малеимида с эритроцитами крови детей с наследственным сфероцитозом (НС) и граничные значения показателей интенсивности флуоресценции по результатам исследования группы практически здоровых людей.Материалы и методы. Были исследованы 24 образца венозной крови от детей с НС и 72 образца от здоровых лиц. Тест ЕМА проводился с помощью проточной цитометрии с оценкой средней интенсивности флуоресценции (СИФ). В каждой постановке СИФ образца от пациента с НС сопоставлялся с аналогичным показателем для 3 практически здоровых лиц. Рассчитано отношение СИФ исследуемой пробы к среднему значению трех здоровых контролей. Результаты и обсуждение. Установлено, что у всех пациентов с НС значения СИФ были ниже, чем в контрольной группе (р=0,001), в среднем на 34,9%. «Сырые» показатели СИФ вариабельны в широком диапазоне даже в одной лаборатории и обладают низкой специфичностью в диагностике НС (43,1% при точке разделения СИФ ≤409 усл. ед.). Отношение СИФ исследуемой пробы к среднему значению трех здоровых контролей может использоваться в целях диагностики НС (AUC 0,987; 95% ДИ 0,941–0,999). При отношении ≤0,79 (отклонение от контрольных образцов более 21%) чувствительность теста 100%, специфичность 98,6%, а значения СИФ≤0,76 соответствуют 100%-й специфичности теста.Выводы. Тест ЕМА может быть использован в комплексной диагностике НС у детей. Для исследования можно использовать как периферическую, так и венозную кровь, а количество контролей можно сократить до трех. Диагностически значимым следует считать снижение СИФ образца более чем на 21% от среднего значения контрольных образцов. Purpose. To determine the diagnostic value of the eosin-5-maleimide (EMA) dye binding test with red blood cells of children with hereditary spherocytosis (HS) and to determine the boundary values of the fluorescence intensity indicators in the group of practically healthy people.Materials and methods. We examined 24 samples of venous blood from children with HS and 72 samples from healthy individuals. The EMA test was performed using flow cytometry with assessment of the mean fluorescence intensity (MFI). In each setting, the MFI of a sample from a patient with HS was compared with that for 3 apparently healthy individuals. The ratio of the MFI of the test sample to the mean value of the three healthy controls was calculated.Results and discussion. It was found that in all patients with HS, the MFI values were lower than in the control group (p=0.001), on average by 34.9%. “Raw” MFI indicators are variable within a wide range even in one laboratory, and they have low specificity in the diagnosis of HS (43.1% at the MFI cut-off point ≤409 conventional units). The ratio of the MFI of the test sample to the mean value of three healthy controls can be used to diagnose HS (AUC 0.987; 95% CI 0.941–0.999). With the ratio≤ 0.79 (deviation from the control samples is more than 21%), the sensitivity of the test is 100%, the specificity is 98.6%, and the MFI values ≤ 0.76 correspond to 100% test specificity.Conclusion. The EMA test can be used in the complex diagnosis of HS in children. For EMA binding test, both peripheral and venous blood can be used, and the number of controls can be reduced to three. A decrease in the sample MFI by more than 21% of the average value of the control samples should be considered diagnostically significant for HS.